关于抗体的选择
蛋白特---:针 对需要检测的蛋白查找抗体,几个细节要区分,重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测,对抗体的要求是不一样的,注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不 是全长表达,则需要注意抗体的免yi原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白能清楚其剪切与修饰的方式,无血清细胞冻存液批发,特殊表型的蛋白需要进行序列比对,并结合抗体免 yi原序列,查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具---点,不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在,不宜一概而论。
培养基培养方法
1.灭菌,按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、---酸会使培养基的颜色变深。
2.摆斜面,灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。
3.贮存,培养基在30℃下放置---,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。
对于大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在 -20 度/-80 度对绝大多数抗体来说,厦门无血清细胞冻存液,保存在-20 度是完全足够了。没有任何证据显示保存在-80度 会有更多的好处!
(1) 分装可以zui大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
(2) 分装的量以一次实验用完为好,zui少不能少于10ul 每份。因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响
(3) 复融后的分装抗体如果一次用不完,无血清细胞冻存液公司,将剩余母液保存在4 度,无血清细胞冻存液,避免再冻起来!
(4) 抗体工作液应该当天配制当天用完,在4 度 尽量不要超过1 天。
(5) 避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层,而不是门上。
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